Молекулярная онкология
У клеток грызунов (гетерологическая модельная система) есть важное преимущество — в них значительно легче обнаружить методами молекулярной гибридизации перенесенные и функционирующие онкогены. Эти гены, как правило, по сайтам рестрикции отличаются от эндогенных аллелей протоонкогенов. Следует учитывать и тот факт, что некоторые онкогены могут действовать как рецессивные или как слаботрансформирующие аллели, невыявляемые в используемой в настоящее…
Единичное генетическое событие (точковая мутация), приводящее к образованию трансформирующих генов семейства ras, само по себе еще недостаточно для достижения злокачественного перерождения нормальных фибробластов. Необходимо другое повреждение (точная природа которого еще не установлена), способное к кооперированию с трансформирующим геном. В этом случае наступает кажущаяся «одностадийная» трансформация фибробластов, что в ее истинной сущности не противоречит общей модели…
Группой неидентифицированных трансформирующих генов, также не связанных с онкогенами ретровирусов млекопитающих, являются онкогены нейробластом и глиобластом крыс, индуцированных трансплацентарно этилнитрозомочевиной [Shih С-et al., 1981; Huh N. et al., 1983]. После 2—3 циклов трансфекции клеток NIH ЗТЗ препаратами ДНК, изолированными из нейро-и глиобластом, возникают очаги независимой от субстрата пролиферации, которые уже в 3-м и 4-м циклах…
Различные механизмы активации клеточных протоонкогенов в трансформирующие онкогены рассмотрены в одном из предыдущих разделов этой книги. Поэтому здесь мы опишем лишь один дополнительный биологический феномен, также модифицирующий трансформирующие гены с далекоидущими функциональными последствиями. Мы имеем в виду процесс метилирования ДНК и его роль в экспрессии онкогенов. Благодаря большому числу новых работ с использованием методов генной…
Метилирование цитозина в последовательности 5-ЦГ осуще-ствляется путем переноса метильной группы СНз от аденозил-метионина с помощью метилазы (метилтрансферазы) в процессе репликации ДНК. При этом донор СН3-группы, S-аденозилметио-нин, превращается в S-аденозилгомоцистеин. Аналогичным образом происходит процесс превращения аденина в 6-метиламинопурин. Метилтрансфераза функционирует на дуплицирующейся цепи ДНК таким образом, что вновь синтезированная нить ДНК в отношении степени метилирования становится…
Важные результаты, подтверждающие связь метилирования ДНК с экспрессией генетической информации и дифференцировкой, были получены при использовании аналога цитозина, 5-азацитидина (т. е. цитозин, в котором углерод в 5-м положении заменен на атом азота, вследствие чего он не может быть метилирован). Формула P. Jones и S. Taylor (1980) показали, что 5-азацитидин тормозит метилирование вновь синтезированной ДНК в…
Провирусные геномы, которые не экспрессировались и поэтому были неинфекционны в экспериментах по трансфекции, оказались высокометилированными [Jaenisch R., 1982]. Напротив, удаление метильных групп путем особого клонирования генов в векторах бактериальных систем способствовало превращению провирусов в экспрессируемые, высокоинфекционные [Simon D. et al., 1983]. На сегодня только незначительное число исследований посвящено изучению связи экспрессии протоонкогенов с метилированием их…
Группа Dino-Dina [Cattoni S. et al., 1982] изучила метилированность «молчащего» гена c-mos в клеточных линиях мышей и крыс, трансформированных вирусом саркомы мышей (несущим онкоген v-mos) или химическими веществами. Оказалось, что в обоих случаях протоонкоген c-mos был гиперметилирован, тогда как v-mos — интегрированный в мышиный геном и экспрессируемый — был гипометилирован. Для определения степени метилированности протоонкогена…
Нам также удалось показать [Huh N. et al., 1983] связь экспрессии генов со степенью их метилирования. Так, было установлено, что экспрессия Ha-ras в опухолях мозга крыс, индуцированных этилнитрозомочевиной (клеточные линии серий ВТ, GV и TV) [Laerum D., Rajewsky M., 1975], коррелировала с его относительным гипометилированием. В эмбриональных клетках мозга крыс (клетки-мишени), где также имеет место…
Высокую чувствительность клеток NIH ЗТЗ мышей к трансформирующим генам семейства ras человека и других видов животных можно объяснить низкой степенью метилирования рестрикционных сайтов эндонуклеаз Нра II/Msp I, содержащих 5-ЦГ-последовательности, и поэтому высоким уровнем экспрессии соответствующего онкогена. Интеграция в процессе трансфекции гипометилированного онкогена Ha-ras в геном пренеопластических клеток мышей NIH ЗТЗ приводит к его активной экспрессии….
