Данные, полученные при исследовании распределения ферментов

23.09.2014г.

Данные, полученные при исследовании распределения ферментов, растворенных в жидкой фазе, в системе раствор — пищевые частицы дают основание считать, что в естественных условиях пищеварения в распределении ферментов дуоденального содержимого наряду с флокулярными структурами участвуют и частицы пищи.

Экспериментальные данные, характеризующие распределение ферментов между жидкой фазой энтеральной среды и элементами ее плотной фазы, были получены на примере панкреатического трипсина.

С этой целью, измерив исходную активность фермента в тощаковом содержимом 12-перстной кишки при pH среды 5,0, дуоденальный сок разливали в три пробирки по 2 мл в каждую. Содержимое 1-й пробирки по обычной методике закисляли 0,1 М НСl; во 2-ю пробирку вводили 75 мг пищевого субстрата — лиофизированного препарата яичного белка с диаметром частиц 0,1—1 мм; в 3-ю — ту же дозу яичного белка, а затем закисляли по той же методике.

Адсорбцию трипсина на флокулярных структурах, пищевых субстратах и агломератах, образовавшихся при закислении среды, исходно содержащей пищевой субстрат, изучали при pH 5,0, поскольку при этом значении pH образовавшиеся флокулярные структуры в силу гистерезиса еще не растворялись. О величине адсорбции на исследуемых структурах судили по изменению активности фермента в надосадочном растворе.

После 20-минутно го перемешивания при 37° (в предварительных экспериментах было установлено, что этот срок достаточен для достижения адсорбционного равновесия) осадок отделяли центрифугированием, и в надосадочной жидкости вновь измеряли активность трипсина, устанавливая таким образом величину адсорбции на каждой из исследуемых структур.

Десорбцию трипсина из указанных структур осуществляли тремя последовательными сменами элюирующего буфера. О величине десорбции, проведенной при pH 5,0; 6,0; 7,0, судили по ферментной активности надосадочных растворов и осадка после третьей смены элюирующего буфера.

Результаты этих экспериментов показали, что на поверхности всех исследуемых структур сорбируется основная масса (от 78 до 90%) трипсина, исходно содержавшегося в дуоденальном содержимом (смотрите таблицу ниже 1-й столбец).

Активность панкреатического трипсина, адсорбированного на флокулярных гелевых структурах, поверхности пищевого субстрата и агломерате, и ее изменения после десорбции

Система Исходная После десорбции
pH 5,0 pH 6,0 pH 7,0
Флокулярные гелевые структуры 84±4
Р>0,1		 554-9
Р< 0,05		 50±7
Р<0,01		 1±1
Р <0,001*
Пищевой субстрат 78±4
Р<0,01		 37±5
Р<0,01		 27±4
Р<0,01		 11±4
Р < 0,05**
Агломерат пищевого субстрата с флокулами 90±3 50±6 49±7 20±5

Примечание. Данные приведены в процентах от активности трипсина в дуоденальном содержимом.

*Достоверности различий между активностью трипсина, адсорбированного на лицевом субстрате и флокулярных гелевых структурах.

**Достоверности различий между активностью трипсина, адсорбированного на пищевом субстрате и агломерате.

Однако если принять во внимание, что масса использованного в опыте субстрата равнялась 37,5 мг/мл, а масса флокул, образующихся из 1 мл среды, как уже было сказано выше, варьирует в среднем от 5 до 10 мг/мл, становится очевидным, что флокулярные структуры адсорбируют трипсин значительно активнее, чем пищевой субстрат.

Следствием этого является достоверное увеличение адсорбции трипсина на поверхности агломерата по сравнению с пищевым субстратом.

«Пищеварение и гомеостаз»,
Ю.М.Гальперин, П.И.Лазарев



Смотрите также: