Увеличение активности альфа-амилазы в экспериментах

22.09.2014г.

Электрическая ножеточка – настоящий помощник в вашем быту. Профессиональные ножеточки — экономичны и компактны в домашнем использовании.

Наблюдающееся в экспериментах увеличение активности α-амилазы после гелеобразования, по-видимому, объясняется ее взаимодействием со структурами геля.

Для проверки этого предположения в следующей серии опытов после определения активности α-амилазы в жидкой и плотной фазах коацервата при рH растворов 5,5 плотную фазу растворяли, доводя pH раствора в котором были взвешены флокулы геля, до pH 8, а затем восстанавливали исходную величину pH (5,5) и вновь определяли активность фермента.

В силу наблюдающегося гистерезиса гелеобразования при таком закислении среды еще не происходило (это подтверждено микроскопическим контролем). Это давало возможность при том же значении pH исследовать активность α-амилазы, ранее фиксированной на флокулах.

Сравнение результатов измерения активности фермента до и после растворения флокул дало возможность получить данные, характеризующие влияние фиксации α-амилазы гелем на активность этого фермента.

Результаты этих экспериментов показали, что после образования коацервата активность α-амилазы, связанной с плотной фазой, составила 12,6±0,54 уел. ед., т. е. была выше, чем в дуоденальном соке (в среднем в 1,3 раза). Вследствие этого суммарная активность в коацервате в среднем составляла 187±6,12% от активности дуоденального сока (9,8±0,47 уcл. ед.).

После растворения флокул активность α-амилазы при том же значении pH составила 3,6±0,7 уcл. ед., т. е. 30±12% от активности в растворе, содержащем взвешенные флокулы, и 40,9±1,3% от ее активности в дуоденальном соке.

В результате суммарная амилолитическая активность супернатанта и осадка снижается и оказывается в среднем на 13,3±0,6% меньше, чем активность дуоденального сока.

Последнее, по-видимому, объясняется частичной денатурацией белка фермента в процессе резких колебаний pH среды, в которой он растворен.

Таким образом, результаты этой серии опытов подтвердили предположение о том, что активация α-амилазы в коацервате обусловлена связью фермента с флокулами геля, образующегося при изменении pH энтеральной среды.

Еще большая активация ферментов, связанных с флокулярными структурами, была обнаружена при исследовании распределения между фазами образующегося коацервата панкреатической липазы и моноглицеридлипазы.

Принципиально результаты этих исследований близки к полученным при исследовании α-амилазы: выпадение флокул геля неизменно сопровождается достоверным снижением активности панкреатической липазы и моноглицерид-липазы в жидкой фазе коацервата (смотрите таблицу).

Показатели активности липолитических ферментов в дуоденальном соке, его жидкой и плотной фазах, в млмоль/час/л

Показатели статистической обработки Дуоденальный сок Жидкая фаза Плотная фаза
Панкреатическая
липаза		 Моноглицерид-липаза Панкреатическая
липаза		 Моноглицерид-липаза Панкреатическая липаза Моноглицерид-липаза
M 1056,8 248,6 711,8 160,0 4256,0 1768,8
m 110,4 65,9 150,9 45,5 1304,0 287,0
n 8 7 8 7 8 8
Р — — <0,05 <0,05 <0,05 <0,001

Примечание. Р—достоверность различий между исследованными образцами и дуоденальным соком.

Липолитическая активность этих ферментов в образующемся осадке повышается по сравнению с дуоденальным соком для панкреатической липазы в среднем в 4, а для моноглицерид-липазы в 7 раз.

Столь выраженная концентрация ферментов приводит к тому, что их липолитическая активность на единицу массы влажного осадка по сравнению с активностью на единицу массы сока растет соответственно более чем в 200—350 раз.


«Пищеварение и гомеостаз»,
Ю.М.Гальперин, П.И.Лазарев



Смотрите также: