Определение лейцинаминопептидазы, катепсинов В и D, пепсина на поверхности двенадцатиперстной кишки

В пристеночных слизистых наложениях на поверхности двенадцатиперстной кишки взрослых собак наряду с трипсином и химотрипсином достоверно определяются лейцинаминопептидаза, катепсины В и D, пепсин. Результаты экспериментов по количественной оценке активности этих ферментов представлены в таблице ниже.

Активность кишечных пептидов в слизистых наложениях и дуоденальном содержимом у собак при проведении ингибиторного анализа и без него (в мкМ субстрата на 1 г материала за 1 мин)

* Ингибитор фенантролин.
** Ингибитор иодацетамид.
*** Предварительная инкубация 2 ч, pH 8,5, t° = 40° С.

Приведенные данные свидетельствуют, что селективное ингибирование лейцинаминопептидазы и катепсина В снижает гидролиз использованных субстратов гомогенатами слизистых наложений соответственно на 70 и 20%.

Скорость гидролиза этих же субстратов дуоденальным содержимым настолько низка, что не может быть достоверно определена с помощью используемых методов. В условиях определения, проводимого в данной работе, протеолиз гемоглобина может осуществляться как катепсином D, так и пепсином, который в составе желудочного содержимого поступает в 12-перстную кишку и может адсорбироваться в слое слизи.

Как известно, щелочная денатурация пепсина в отличие от катепсина D в значительней мере необратима (предварительная 2-часовая инкубация препарата пепсина при pH 8,5 и t° = 40°С снижает пепсиновую активность в 30 раз).

Этот факт и был использован для раздельного определения гидролитической активности катепсина D и пепсина. Результаты проведенных измерений говорят о том, что после щелочной деградации в гомогенате слизистых наложений скорость гидролиза гемоглобина, используемого в качестве субстрата, снижается до 70% от исходной.

Для дуоденального содержимого эти значения составляют также 70 и 30% соответственно, хотя скорость гидролиза гемоглобина при действии этого источника ферментов составила лишь около 6% от наблюдаемой при действии равных объемов гемогената слизистой оболочки. Это дает основание считать, что гидролиз гемоглобина при действии гемогената слизистых наложений на 70% обеспечивался действием катепсина D и на 30% — пепсином.

Представленные данные говорят о том, что пепсин, поступающий из желудка в полость 12-перстной кишки, частично адсорбируясь в слое слизистых наложений, может участвовать в гидролизе белков, транспортирующихся через его толщу в зону мембранного пищеварения.

Проведенное определение липолитических ферментов в слое слизистых наложений обнаружило значительное обогащение слоя панкреатической липазой и моноглицеридлипазой по сравнению с тощаковым дуоденальным содержимым.

Данные литературы, свидетельствующие об активации липолитических ферментов на поверхности их субстратов, дают основание предположить, что причиной обнаруженного повышения активности является сорбция ферментов на липидах, входящих в состав слизистых наложений. Проведенные исследования показали, что концентрация липидов в слизистых наложениях более чем на порядок превышает обнаруженную в дуоденальном соке (смотрите рисунок ниже).

Состав липидов тощакового дуоденального содержимого и слизистых наложений, мг % и % (в скобке) от общих липидов

• Механизм транспорта веществ
• Получение липосом, используемых в экспериментах
• Строение молекулы гликопротеина слизи
• Транспорт веществ через слой слизи
• Получения информации о молекулярном строении гликопротеинов
• Обогащение слизистых наложений всеми фракциями липидов
• Полимерные питательные вещества и продукты их полостного гидролиза
• Активность липолитических ферментов в тощаковом содержимом
• Биохимическое исследование активности ферментов
• Присутствие ферментов в кишечной слизи
• Данные электронной микроскопии
• Объект морфологического исследования
• Наращивание слоя слизистых наложений со стороны поверхности стенки кишки