Присутствие ферментов в кишечной слизи

Присутствие ферментов в кишечной слизи может быть обусловлено адсорбцией панкреатических эндогидролаз, солюбилизированных в кишечном содержимом, поступлением в толщу слоя синтезированных энтероцитами гидролаз в составе элементов отторгшегося кишечного эпителия, и, наконец, поступлением ферментов, содержащихся в крови, в составе трансудата, проникающего в полость кишки через слой слизистых наложений.

Установлено, что белки, поступающие из крови в просвет пищеварительного канала, обнаруживаются в составе слизи, в которой выявлено 13 протеинов плазмы. Близкий спектр белков обнаруживается в маточной слизи животных.

Представленные данные говорят о том, что факт присутствия отдельных ферментов в слизи установлен, однако сведения о составе и активности пищеварительных ферментов в слое слизистых наложений, покрывающем люминальную поверхность тонкой кишки, практически отсутствуют.

С целью выявления возможного участия слоя слизистых наложений в процессе деградации транспортируемых через него веществ были проведены гистохимические и биохимические определения в материале слоя активности основных эндо- и экзогидролаз, содержащихся в пищеварительных соках.

Гистохимические определения активности синтезируемых эпителиоцитами ферментов проводили в биоптатах тонкой кишки собак и крыс. Биоптаты замораживали в пентане, охлажденном смесью сухого льда и ацетона.

В криостатных срезах толщиной 10—12 мкм определяли активность ферментов: щелочной фосфатазы (ЩФ)—по методу [3] (субстрат нефтол-A_s—ВY-фосфат), лейцинаминопептидазы (ЛАП) по методу [117] (субстрат лейцил-А-метокси-нафтиламид), дипептидаламинопептидазы (ДАП) по методу [40] (субстрат глицинпролин-4-метокси-β-нафтиламид), сахарозы — по методу [100] (субстрат 6-бром-2-нафтил-α-D-глюкопиранозид), лактазы — по методу [40] (субстрат α-нафтил-β-глюкозид). Для предотвращения диффузии продукта реакции во время гистохимического исследования применяли полупроницаемые мембраны, на которые помещали образец.

Гистохимические определения показали, что все тестируемые ферменты присутствуют в слое в активном состоянии.

Гистохимическое окрашивание выявило продукты реакции сахарозы и лактозы только в щеточной кайме и мембранах отторгшихся эпителиальных элементов, находящихся в слое слизи (смотрите на рисунке ниже).

Сахараза в тощей кишке крысы Продукт реакции виден в щеточной кайме и в отторгшихся эпителиальных структурах слоя слизистых наложений. Реакция одновременного азосочетания по методу Гроссрау. Об. 20, ок. 4. Препарат Л. Н. Бандурко.

Лактаза в тощей кишке крысы Реакция одновременного азосочетания по методу Лойда. Объяснения те же, что к рисунку выше.

Это указывает на сохраняющуюся связь названных ферментов с эпителиальными клетками, находящимися в слое слизи. Продукты реакции ЩФ, ЛАП и ДАП обнаруживаются как в непосредственной близости от мембран эпителиоцитов, так и в пространстве слоя слизистых наложений, окружающем отторгнутые элементы эпителия (смотрите на  рисунки ниже).

Щелочная фосфатаза в тощей кишке собаки

А — криостатный срез, помещенный на полупроницаемую мембрану. Продукт реакции виден в щеточной кайме энтероцитов ворсинок и в покрывающем их слое слизи. Об. 20, ок. 4; Б — отпечаток с поверхности слизи, покрывающей эпителиальный пласт, на полупроницаемую мембрану. Продукт реакции распределен в слое слизи, большее его количество выявляется в области отторгшихся эпителиальных структур и слизи, непосредственно прилегающей к поверхности эпителиального пласта. Реакция одновременного азосочетания по Берстону. Об. 40, ок. 4 [1]. Препараты Л. Н. Бандурко.

Лейцииамииопептидаза в тощей кишке крысы (А) и собаки (Б)

А — криостатный срез, помещенный на полупроницаемую мембрану. Продукт реакции виден в зоне щеточной каймы энтероцитов и в покрывающем их слое слизи; Б — отпечаток с поверхности слизи, покрывающей эпителиальный пласт, на полупроницаемую мембрану. Продукт реакции виден в слое слизи, большее его количество выявляется в непосредственной близости от отторгшихся эпителиальных структур. Реакция одновременного азосочетания по Нахласу. Об. 20, ок. 5. Препарат Л. Н. Бандурко.

Дипептидил(амино)пептидаза в тощей кишке крысы Продукт реакции виден в щеточной кайме энтероцитов и в слизи, покрывающей эпителиальный пласт. Криостатный срез, помещенный на полупроницаемую мембрану. Реакция одновременного азосочетания по методу Лойда. Об. 20, ок. 5 [1]. Препарат Л. Н. Бандурко.

Такое распределение окрашивания свидетельствует о распространении молекул этих ферментов в окружающем клетки материале слоя слизи и приобретении слоем соответствующей гидролитической активности.

«Пищеварение и гомеостаз»,
Ю.М.Гальперин, П.И.Лазарев

• Механизм транспорта веществ
• Получение липосом, используемых в экспериментах
• Строение молекулы гликопротеина слизи
• Транспорт веществ через слой слизи
• Получения информации о молекулярном строении гликопротеинов
• Обогащение слизистых наложений всеми фракциями липидов
• Полимерные питательные вещества и продукты их полостного гидролиза
• Определение лейцинаминопептидазы, катепсинов В и D, пепсина на поверхности двенадцатиперстной кишки
• Активность липолитических ферментов в тощаковом содержимом
• Биохимическое исследование активности ферментов
• Данные электронной микроскопии
• Объект морфологического исследования
• Наращивание слоя слизистых наложений со стороны поверхности стенки кишки