Главная / Молекулярная онкология / Клеточные онкогены

Клеточные онкогены


Точковые мутации в канцерогенезе привлекли особое внимание в связи с серией статей по активации онкогенов, появившихся в конце 1982 г. Проведенные исследования особенно примечательны в том отношении, что впервые в истории онкологии приурочили сложнейшее биологическое явление — трансформацию и туморогенез — к конкретному простому молекулярному акту — замене одного нуклеотида ДНК другим. Исчерпывается ли указанным…


Наблюдается значительная консервативность всей аминокислотной последовательности между гомологичными ras-генами у отдаленных видов животных. Так, Ha-ras-ген человека отличается от вирусного Ha-ras-гена, имеющего крысиное происхождение, лишь тремя (из 189) остатками аминокислот. Сходно с этим человеческий Ki-ras-ген (состоящий из 4 экзонов: I, II, III и IV) отличается от вирусного Ki-ras-гена, также имеющего крысиное происхождение, лишь 7 из 189…


Обработкой рестрикционными эндонуклеазами ДНК опухоли и гомологичной нормальной ткани расщепили на фрагменты, с помощью техники трансфекции идентифицировали сегменты, содержащие онкоген и протоонкоген, и клонировали те и другие. Таким образом, исследователи располагали клонированными вариантами обоих генов, поэтому определение характера мутации и ее точной локализации при современном уровне развития молекулярной биологии и генной инженерии не представляло непреодолимых…


Протоонкоген и онкоген (а) расщепляли эндонуклеазами в одном и том же месте (б) и сегменты лигировали (в) перекрестно. Рекомбинанты испытывали на трансфекционную активность. «Вырезали» более мелкие фрагменты (г, д). В наименьших фрагментах (350 нуклеотидов) устанавливали последовательность оснований и выявляли точку мутации. Специфические сегменты, «вырезанные», как указано выше, из двух генов, соединялись с помощью фермента ДНК-лигазы…


Превращение протоонкогена клеток мочевого пузыря человека в онкоген [Weinberg R., 1983] Поиск мутагенного повреждающего эффекта, активирующего протоонкогены клетки, не был случайным. Известно много работ по химическому канцерогенезу, указывающих на устойчивую корреляцию канцерогенной активности соединений с их мутагенной способностью [McCann J. et al., 1975; McCann J., Ames В., 1976]. Это свидетельствует о том, что ДНК является…


Первые указания на присутствие в опухолевых ДНК онкогенно-активных последовательностей были получены в опытах по изучению чувствительности биологической активности ДНК к обработке сайтспецифическими эндонуклеазами [Lane M. et al., 1981; Shilo В., Weinberg R., 1981]. С. Tabin и соавт. (1982) провели генетическое картирование функционально измененной области онкогена. Для этого они осуществили in vitro гомологичную рекомбинацию между клонами…


Разница между 350-нуклеотидными сегментами ДНК нормальных и опухолевых клеток находилась в области первого экзона, кодирующего белок р21, на расстоянии 60 нуклеотидов от сайта расщепления Хта I, в триплете, кодирующем глицин в нормальном крысином и человеческом c-Ha-ras-генах. Гомологичная последовательность в онкогене EJ кодировала не глицин, а валин. Именно эта замена глицина была ответственной за изменение функции…


Высказываются следующие предположения [Tabin С. et al., 1982]: Глицин является единственной аминокислотой, не содержашей боковой цепи. Поэтому он способен участвовать в изгибах, свертываниях полипептидного скелета белка и дестабилизирует а-спирали [Cantor С, Schimmel P., 1980]. Поэтому замена глицина валином или аргинином приводит к резкому изменению в локальной стереохимической структуре белка. Потеря глицина в остатке 12 (среди…


Исследование в Национальном раковом институте выполнили Е. Reddy и соавт. (1982). Авторы проанализиро-вали генетические изменения, происходящие в ткани мочевого пузыря человека при ее неопластическом перерождении, исследовали нормальную ткань и клеточную линию Т24 карциномы мочевого пузыря, обнаружили точковую мутацию в протоонкогене при его активации в онкоген. При этом, как и в изложенной выше работе С. Tabin…


Замена в плазмиде Т24-СЗ-фрагмента ДНК, локализованного между сайтами расщепления Xho I и Крп I, нормальными последовательностями полностью лишала его трансформирующей активности. Напротив, замена нормальной Xho I-Kpn I-области ДНК в pbc-N I (плазмида, содержащая фрагменты клеточного протоонкогена) соответствующим доменом плазмиды рТ24-СЗ, генерировала плазмиду (рХКТ-82), которая трансформировала клетки NIH ЗТЗ. С помощью этой же генно-инженерной техники обмена…