Важные результаты, подтверждающие связь метилирования ДНК с экспрессией генетической информации и дифференцировкой, были получены при использовании аналога цитозина, 5-азацитидина (т. е. цитозин, в котором углерод в 5-м положении заменен на атом азота, вследствие чего он не может быть метилирован). Формула P. Jones и S. Taylor (1980) показали, что 5-азацитидин тормозит метилирование вновь синтезированной ДНК в…
Метилирование цитозина в последовательности 5-ЦГ осуще-ствляется путем переноса метильной группы СНз от аденозил-метионина с помощью метилазы (метилтрансферазы) в процессе репликации ДНК. При этом донор СН3-группы, S-аденозилметио-нин, превращается в S-аденозилгомоцистеин. Аналогичным образом происходит процесс превращения аденина в 6-метиламинопурин. Метилтрансфераза функционирует на дуплицирующейся цепи ДНК таким образом, что вновь синтезированная нить ДНК в отношении степени метилирования становится…
Различные механизмы активации клеточных протоонкогенов в трансформирующие онкогены рассмотрены в одном из предыдущих разделов этой книги. Поэтому здесь мы опишем лишь один дополнительный биологический феномен, также модифицирующий трансформирующие гены с далекоидущими функциональными последствиями. Мы имеем в виду процесс метилирования ДНК и его роль в экспрессии онкогенов. Благодаря большому числу новых работ с использованием методов генной…
Группой неидентифицированных трансформирующих генов, также не связанных с онкогенами ретровирусов млекопитающих, являются онкогены нейробластом и глиобластом крыс, индуцированных трансплацентарно этилнитрозомочевиной [Shih С-et al., 1981; Huh N. et al., 1983]. После 2—3 циклов трансфекции клеток NIH ЗТЗ препаратами ДНК, изолированными из нейро-и глиобластом, возникают очаги независимой от субстрата пролиферации, которые уже в 3-м и 4-м циклах…
У клеток грызунов (гетерологическая модельная система) есть важное преимущество — в них значительно легче обнаружить методами молекулярной гибридизации перенесенные и функционирующие онкогены. Эти гены, как правило, по сайтам рестрикции отличаются от эндогенных аллелей протоонкогенов. Следует учитывать и тот факт, что некоторые онкогены могут действовать как рецессивные или как слаботрансформирующие аллели, невыявляемые в используемой в настоящее…
Опухолевые клетки, из которых выделяются препараты ДНК, содержащие трансформирующие гены, существенно отличаются от клеток, используемых в качестве реципиентных в экспериментах по трансфекции. Так, онкогены, происходящие из перечисленных в табл. 14, 15, 16 опухолей человека и животных, могут трансформировать мышиные клетки NIH ЗТЗ. Это является определенным доказательством того, что тот или иной конкретный онкоген, например EJ-c—Ha-ras,…
Трансформирующий потенциал рестрикционных фрагментов ДНК опухолей мышей и человека в культуре клеток NIH ЗТЗ был идентичным. Эти данные свидетельствуют о присутствии и активации в указанных опухолях родственных трансформирующих генов типа mam или tx-4. Основываясь на данных по чувствительности трансформирующих последовательностей к эндонуклеазам рестрикции и на их сопоставлении с физической картой протоонкогена c-Ha-ras рака мочевого пузыря,…
М. Lane и соавт. (1982) первыми обнаружили трансформирующие свойства препаратов ДНК из Т- и В-клеточных лимфом мышей и человека в культуре клеток NIH ЗТЗ. В экспериментах по трансфекции авторы установили, что трансформирующий потенциал рестрикционных фрагментов испытуемых препаратов ДНК различен. Использование эндонуклеаз рестрикции и получаемых с их помощью фрагментов ДНК позволило достаточно точно определить родство трансформирующих…
Размер трансформирующего гена B-lym человека определен. Он меньше 0,95 т. п. о. Активация этого гена в клетках лимфомы Беркитта не связана с амплификацией или генными перестройками. В контексте трансформации В-лимфоцитов следует рассматривать также амплификацию и транслокацию гена с-тус из хромосомы 8 в хромосому 14 или 22, также часто встречающуюся в лимфомах Беркитта. Вероятно, в неопластический…
В опытах по трансфекции клеток NIH ЗТЗ препаратами ДНК из куриной В-клеточной лимфомы, G. Goubin и соавт. (1983) выявили трансформирующий ген, неидентичный ранее известным онкогенам остротрансформирующих ретровирусов животных. Позже A. Diamond и соавт. (1983) показали, что такой же тип трансформирующего гена присутствует в 6 клеточных линиях лимфомы Беркитта. В связи с тем, что указанные неопластические…
