J. Grath и соавт. (1983) показали, что c-Ki-ras 2 потенциально кодирует 2 различных белка р21 (молекулярная масса 21 000) путем дифференциального использования двух из пяти его кодирующих экзонов. Оставалось неясным, какой из этих белков (или оба) обладает трансформирующей активностью. Как видно из изложенного выше, активация гена c-Ha-ras 1 в клетках Т24 карциномы мочевого пузыря человека,…
Глициновые остатки известны своей способностью изменять а-спиральную структуру белков. Авторы определили, что N-терминальная часть белка р21, кодированного геном с-has/bas-l, содержит 2 а-спиральные области из 10 и 13 аминокислот, соединенные петлей из 7 аминокислот. Петлевидная структура придает гибкость при сгибании и складывании полипептидной молекулы. Если глицин в положении 12 белка р21 заменен валином, то размер петлевой…
Е. Reddy и соавт. (1982) отмечают общее генетическое изменение в человеческом и ретровирусных трансформирующих генах. По их данным, сравнение первых 37 аминокислот белка р21, кодируемого нормальным геном человека с-has/bas-l, с их ретровирусным партнером показало полную идентичность, кроме позиции 12, т. е. аминокислоты, которая изменена в Т24. В белке р21, кодируемом Ha-MSV, в этом положении присутствует…
Замена в плазмиде Т24-СЗ-фрагмента ДНК, локализованного между сайтами расщепления Xho I и Крп I, нормальными последовательностями полностью лишала его трансформирующей активности. Напротив, замена нормальной Xho I-Kpn I-области ДНК в pbc-N I (плазмида, содержащая фрагменты клеточного протоонкогена) соответствующим доменом плазмиды рТ24-СЗ, генерировала плазмиду (рХКТ-82), которая трансформировала клетки NIH ЗТЗ. С помощью этой же генно-инженерной техники обмена…
Исследование в Национальном раковом институте выполнили Е. Reddy и соавт. (1982). Авторы проанализиро-вали генетические изменения, происходящие в ткани мочевого пузыря человека при ее неопластическом перерождении, исследовали нормальную ткань и клеточную линию Т24 карциномы мочевого пузыря, обнаружили точковую мутацию в протоонкогене при его активации в онкоген. При этом, как и в изложенной выше работе С. Tabin…
Высказываются следующие предположения [Tabin С. et al., 1982]: Глицин является единственной аминокислотой, не содержашей боковой цепи. Поэтому он способен участвовать в изгибах, свертываниях полипептидного скелета белка и дестабилизирует а-спирали [Cantor С, Schimmel P., 1980]. Поэтому замена глицина валином или аргинином приводит к резкому изменению в локальной стереохимической структуре белка. Потеря глицина в остатке 12 (среди…
Разница между 350-нуклеотидными сегментами ДНК нормальных и опухолевых клеток находилась в области первого экзона, кодирующего белок р21, на расстоянии 60 нуклеотидов от сайта расщепления Хта I, в триплете, кодирующем глицин в нормальном крысином и человеческом c-Ha-ras-генах. Гомологичная последовательность в онкогене EJ кодировала не глицин, а валин. Именно эта замена глицина была ответственной за изменение функции…
Первые указания на присутствие в опухолевых ДНК онкогенно-активных последовательностей были получены в опытах по изучению чувствительности биологической активности ДНК к обработке сайтспецифическими эндонуклеазами [Lane M. et al., 1981; Shilo В., Weinberg R., 1981]. С. Tabin и соавт. (1982) провели генетическое картирование функционально измененной области онкогена. Для этого они осуществили in vitro гомологичную рекомбинацию между клонами…
Превращение протоонкогена клеток мочевого пузыря человека в онкоген [Weinberg R., 1983] Поиск мутагенного повреждающего эффекта, активирующего протоонкогены клетки, не был случайным. Известно много работ по химическому канцерогенезу, указывающих на устойчивую корреляцию канцерогенной активности соединений с их мутагенной способностью [McCann J. et al., 1975; McCann J., Ames В., 1976]. Это свидетельствует о том, что ДНК является…
Протоонкоген и онкоген (а) расщепляли эндонуклеазами в одном и том же месте (б) и сегменты лигировали (в) перекрестно. Рекомбинанты испытывали на трансфекционную активность. «Вырезали» более мелкие фрагменты (г, д). В наименьших фрагментах (350 нуклеотидов) устанавливали последовательность оснований и выявляли точку мутации. Специфические сегменты, «вырезанные», как указано выше, из двух генов, соединялись с помощью фермента ДНК-лигазы…
