Клеточные онкогены
Вирусный ген ВСР, индуцирующий клеточную трансформацию, был назван src (сарк.). Эволюционное происхождение ретровирусных онкогенов было неясно до открытия положения о том, что ДНК как птиц [Stehelin D. et al., 1976], так и млекопитающих [Spector D. et al., 1978] содержат нуклеотидные последовательности, близкородственные (гомологичные) онкогену src ВСР. Обнаружение этих фактов вызвало к жизни два предположения: все…
Информация по этому поводу неоднозначна и противоречива. С одной стороны, все (кроме одного) локусы с-myc в человеческой ДНК являются неполными и могли бы быть нефункциональными псевдогенами; одна из двух копий c-src-гена в ДНК кур и человека имеет, по-видимому, ненормальную структуру, и десятикратная амплификация c-ras Харвея у Mus pohari не сопровождается усилением экспрессии гена, как если…
Онкоген ВСР был первым из идентифицированных онкогенов. Важный шаг в его открытии был сделан J. Martin (Калифорнийский университет), который в 1970 г. идентифицировал температурочувствительный мутант ВСР. Он показал, что температура способна влиять на способность вируса трансформировать клетки в культуре. С помощью изменения температуры оказалось возможным вызывать обратимую инактивацию гена. Если культуры клеток, инфицированные температурочувствительный мутантом,…
Поскольку выявление экспрессии клеточных онкогенов по кодируемым белкам встречало трудности, основным методом исследования этого процесса явилось изучение транскрипции онкогенов. Было установлено, что практически все c-onc-гены транскрибируются в РНК в нормальных и опухолевых клетках. Отмечено лишь одно исключение: не удалось обнаружить транскрипции c-mos. Этот факт вызывает недоумение, учитывая сильную эволюционную консервативность c-mos. Имелись затруднения и с…
Ген src вскоре приобрел еще большую реальность благодаря исследованиям P. Duesberg, С. Weissmann, M. Billeter и J. Coffin. Они работали со штаммами ВСР, изолированными P. Vogt. Эти штаммы являются «делеционными» мутантами, которые потеряли онкоген и поэтому неспособны индуцировать опухоли или трансформировать клетки в культуре. P. Duesberg и С. Weissmann с сотр. фрагментировали геномы «делеционных» мутантов…
На основании исследований транскрипции клеточных онкогенов были сделаны следующие общие заключения [Bishop J., 1983]. Транскрипция с клет,очных генов (с-опс) происходит в различных тканях и у каждого из исследованных видов позвоночных. Транскрипция c-src и с-тус обнаружена также у Drosophila melanogaster. Количества c-onc-специфической РНК в большинстве клеток исключительно малы (около 1 —10 копий на клетку). Функция каждого…
Считалось, что узнать такой белок, понять, как он действует, — значит раскрыть механизм онкогенеза. Как усложнилась эта ортодоксальная схема в ходе дальнейших исследований, мы укажем позже. Белок, кодируемый геном src, стал известен благодаря работам R. Erickson и соавт. (1980), которые идентифицировали белок, синтезирующийся в пробирке по «инструкциям» генома дикого типа ВСР, но не образующегося в…
Для идентификации клеточных онкобелков сейчас успешно используется стратегия, разработанная для соответствующих ретровирусных онкобелков. В частности, антисыворотка, приготовленная против вирусного трансформирующего белка, как правило, реагирует с гомологичным клеточным белком. Именно этим путем была идентифицирована группа белков, кодируемых c-onc-генами. Хотя идентификация генных продуктов не гарантирует идентификации функции, тем не менее при нынешнем уровне знаний суждение о функции…
Одно время полагали, что онкогенное действие вирусов могло бы рассматриваться как побочное проявление активности других вирусных генов, чьей главной функцией является участие в продукции новых вирусных частиц. Теперь ясно, что репликация ретровирусов протекает нормально в отсутствие онкогенов. Как в этом случае объяснить широкое распространение онкогенов в ретровирусах и их очевидную «консервацию» в ходе эволюции? Десятилетние…
D. Stehelin пошел по оригинальному пути: он создал так называемую «пробу» — радиоактивную ДНК, скопированную исключительно с src-гена с помощью обратной транскриптазы. Скопированная с src-гена ДНК служила в качестве зонда в поиске клеточной ДНК, имеющей нуклеотидную последовательность, идентичную (или очень сходную) таковой src. Поиск проводился с помощью молекулярной гибридизации, в которой цепи нуклеиновой кислоты (ДНК…
