Главная / Молекулярная онкология / Клеточные онкогены / Активация клеточных протоонкогенов в трансформирующие онкогены путем точковых мутаций (Обработка рестрикционными эндонуклеазами ДНК)

Активация клеточных протоонкогенов в трансформирующие онкогены путем точковых мутаций (Обработка рестрикционными эндонуклеазами ДНК)

Обработкой рестрикционными эндонуклеазами ДНК опухоли и гомологичной нормальной ткани расщепили на фрагменты, с помощью техники трансфекции идентифицировали сегменты, содержащие онкоген и протоонкоген, и клонировали те и другие.

Таким образом, исследователи располагали клонированными вариантами обоих генов, поэтому определение характера мутации и ее точной локализации при современном уровне развития молекулярной биологии и генной инженерии не представляло непреодолимых трудностей и явилось фактически делом техники.

В принципе было сделано следующее.

Исследователи располагали двумя возможностями:

  1. определить полную нуклеотидную последовательность (что теперь и делается во многих случаях) каждого из генов, имеющих протяженность около 5000 п. о.;
  2. сравнить две последовательности. Практически более удобным оказался 2-й путь: сначала установили ту область в генах, которая определяла их критическое различие. Это осуществили путем генерирования рекомбинантов между частями двух генов, при использовании генно-инженерной техники, обеспечивающей подобие классического генетического двойного кроссинговера [Weinberg R., 1983]. Точковая мутация, превращающая протоонкоген в активный онкоген в клеточной линии EJ карциномы мочевого пузыря человека, была идентифицирована: выявлением биологически активного (транс-фекция) сегмента ДНК и секвенированием соответствующих фрагментов ДНК опухолевых и нормальных клеток.


«Молекулярная онкология»,
И.Ф. Сейц, П.Г. Князев



Смотрите также: